熒光定量PCR檢測(cè)送樣要求

熒光定量PCR是通過(guò)熒光染料(SYBR Green)或熒光標(biāo)記的特異性的探針，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過(guò)程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析，計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度�？梢杂糜跈z測(cè)mRNA的基因表達(dá)水平。

實(shí)驗(yàn)流程：

取材-RNA提取逆轉(zhuǎn)錄成cDNA- QPCR擴(kuò)增-數(shù)據(jù)分析-發(fā)報(bào)告

送樣運(yùn)輸要求：

1. 樣品處理

a) 動(dòng)物組織：常規(guī)組織100mg，脂肪組織，結(jié)締組織，纖維化組織適當(dāng)增加。將組織剪切成合適大小后（建議組織塊長(zhǎng)寬高均不大于0.5 cm），然后迅速完全浸泡于5～10倍體積的RNAsolidTM試劑中。（注意：已浸入RNAsolidTM試劑中的組織經(jīng)平衡一段時(shí)間后，可從溶液中取出，切成更小的組織塊，再重新放回RNAsolidTM試劑中；有些比較弱的液體滲透性組織如骨頭等，不適合用RNAsolidTM試劑進(jìn)行RNA保護(hù)。）

b) 植物組織：新鮮的葉、果肉、種子最少100 mg。將嫩葉，嫩莖組織切成合適的大�。ńㄗh長(zhǎng)寬高均不大于0.5 cm）后，然后迅速完全浸泡于5～10倍體積的RNAsolidTM試劑中。（注意：某些植物組織天生具有的屏障，如葉子表面的蠟層可阻礙RNAsolidTM試劑的滲透，對(duì)于此類組織，通常需破壞這些屏障層以允許溶液的浸透。）

c) 細(xì)胞等樣本：收集不小于10^6個(gè)細(xì)胞的沉淀（用PBS清洗1-2次）。之后迅速加入5～10倍體積的RNAsolidTM試劑。

d) 酵母、細(xì)菌等樣本：離心棄上清，收集小米粒大小的單菌體沉淀，然后迅速加入適量的RNAsolidTM試劑完全浸沒(méi)菌體沉淀。

e)全血：最少1 mL新鮮血液EDTA抗凝管，-20度運(yùn)輸。

f)血清：最少1 mL，干冰運(yùn)輸。

g) RNA樣品： OD260/280為1.8-2.0，濃度≥100 ng/μL，體積≥20μL，干冰運(yùn)輸。

h)cDNA：cDNA原液≥20 μL，干冰運(yùn)輸。