一、產(chǎn)品概述
Gel Red是溴化乙錠(Ethidium bromide,EB)的升級(jí)換代產(chǎn)品,主要用于凝膠中DNA、RNA等核酸的染色。它具有安全(致突變性極低且檢測(cè)不到顯著的細(xì)胞毒性)、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。凝膠中的核酸在使用Gel Red染色后用適當(dāng)紫外燈(約300nm波長(zhǎng))檢測(cè)會(huì)呈現(xiàn)紅色熒光,適用于原先使用EB為染料的凝膠成像系統(tǒng)。
二、產(chǎn)品特點(diǎn)
安全性:Gel Red在遠(yuǎn)高于其工作濃度范圍時(shí)均沒(méi)有細(xì)胞毒性及誘變性。艾姆斯氏試驗(yàn)(Ames test)結(jié)果表明,Gel Red的誘變性遠(yuǎn)小于EB。EB在多種致突變測(cè)試中呈現(xiàn)很強(qiáng)的誘變性,而Gel Red僅僅在濃度高達(dá)20微克/毫升時(shí),并在S9代謝活化時(shí)有非常微弱的誘變性。通常Gel Red在凝膠中的工作濃度約為2微克/毫升,大大低于可導(dǎo)致誘變的濃度。
靈敏度高:Gel Red的檢測(cè)靈敏度比EB高8~10倍,在檢測(cè)低濃度、微量DNA或RNA方面比EB更佳,尤其對(duì)小分子量的DNA檢測(cè)非常靈敏。
穩(wěn)定性好:Gel Red的穩(wěn)定性很好,可以室溫長(zhǎng)時(shí)間保存及使用微波爐加熱。同時(shí),它的光穩(wěn)定性良好,可以在室內(nèi)正常光線下操作而無(wú)需避光。由于其熱穩(wěn)定性和光穩(wěn)定性,含Gel Red的凝膠在核酸染色時(shí)的重復(fù)性非常好。
三、使用方法
Gel Red的使用方法和EB一致,可以根據(jù)使用者的偏好或?qū)嶒?yàn)?zāi)康牟捎靡韵路椒ㄖ械囊环N:
瓊脂糖凝膠中添加Gel Red:根據(jù)需要配制適當(dāng)濃度(例如1~3%)的瓊脂糖膠液。在瓊脂糖完全融解后,適當(dāng)冷卻但又不會(huì)使瓊脂糖凝固時(shí),按照每100毫升膠液加入10微升Gel Red的比例(10000:1)加入Gel Red;靹蚝蠹纯砂循傊悄z液倒入制備凝膠的模具中。適量的DNA或RNA在該膠中電泳后,在紫外燈下可以觀察到明亮的核酸條帶。由于Gel Red非常穩(wěn)定,所以也可以在瓊脂糖融解前加入Gel Red,然后再微波爐加熱融解并混勻。
電泳完畢后對(duì)瓊脂糖凝膠染色:按照每100毫升100mM NaCl溶液或水中加入2040微升Gel Red的比例(25005000:1)加入Gel Red,配制成Gel Red染色液。把電泳完畢的瓊脂糖凝膠放到適當(dāng)?shù)娜萜髦,加入適量上述配制好的Gel Red染色液,確保至少蓋住凝膠。在搖床上緩慢搖動(dòng)(約3050rpm)染色2030分鐘。染色時(shí)間根據(jù)膠的厚度而定,膠厚則染色時(shí)間需要長(zhǎng)一些,膠薄則染色時(shí)間可以短一些。染色完畢后,在紫外燈下即可觀察核酸條帶。要觀察到更為清晰的條帶,可以在染色后用水漂洗12次,每次35分鐘,以消除背景。
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