內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑是用于免疫組織化學(xué)（IHC）實(shí)驗(yàn)中的一種試劑，主要用于阻斷組織樣本中內(nèi)源性過氧化物酶的活性，以避免其在后續(xù)染色步驟中產(chǎn)生非特異性信號，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

作用機(jī)制

內(nèi)源性過氧化物酶（如辣根過氧化物酶，HRP）在某些組織（如紅細(xì)胞、白細(xì)胞、肝臟和腎臟）中天然存在。在IHC實(shí)驗(yàn)中，使用HRP標(biāo)記的二抗進(jìn)行顯色反應(yīng)時，這些內(nèi)源性酶會與底物反應(yīng)，導(dǎo)致背景染色增強(qiáng)，干擾目標(biāo)蛋白的特異性檢測。阻斷劑通過抑制內(nèi)源性過氧化物酶的活性，減少非特異性信號。

常用阻斷劑

過氧化氫（H₂O₂）：

常用濃度為0.3%-3%，溶于甲醇或水。

通過氧化作用抑制內(nèi)源性過氧化物酶活性。

處理時間通常為10-30分鐘。

疊氮鈉（NaN₃）：

常用濃度為0.1%-1%。

通過抑制酶活性來阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。

處理時間通常為10-30分鐘。

甲醇-H₂O₂溶液：

甲醇與H₂O₂混合，常用比例為0.3% H₂O₂溶于甲醇。

同時阻斷內(nèi)源性過氧化物酶和部分內(nèi)源性生物素。

使用步驟

組織切片脫蠟、水化。

用阻斷劑（如3% H₂O₂）孵育10-30分鐘。

用緩沖液（如PBS）清洗切片，去除殘留阻斷劑。

進(jìn)行后續(xù)IHC染色步驟。

注意事項(xiàng)

濃度與時間：阻斷劑濃度過高或時間過長可能破壞組織抗原。

組織類型：不同組織內(nèi)源性過氧化物酶含量不同，需優(yōu)化條件。

試劑選擇：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的阻斷劑。